大肠杆菌是与人类日常生活关系非常密切的一类细菌，其主要代谢物有氨基酸、磷酸糖、有机酸、核苷等极性物质，其中氨基酸作为构成生物体蛋白最基本的物质，占代谢物总含量的比例较高，因此准确测定大肠杆菌中氨基酸的含量具有重要意义。
目前，生化样品中氨基酸的前处理方法主要有离心过滤、分散液液微萃取、选择性沉淀、中空纤维膜液相微萃取等。其中，中空纤维膜液相微萃取的样品纯化能力好、富集倍数高、有机溶剂用量少，且中空纤维膜一次性使用，避免了交叉污染。氨基酸的分析方法主要有高效液相色谱法、阴离子交换色谱法、毛细管电泳法、氨基酸分析仪测定法等，与之相联的检测方法有质谱检测、电化学检测、紫外检测、激光诱导荧光检测等。
华东师范大学王清江教授建立了三相中空纤维膜微萃取/超高效液相色谱（HF-LPME/UHPLC）方法，用于大肠杆菌中8种氨基酸的测定。设计了三相中空纤维膜微萃取系统，优化了HF-LPME最佳萃取条件：液膜为正辛醇，接收相NaOH的浓度为0.30 mol/L，给出相样品溶液中盐酸浓度为5.0 mmol/L，NaCl质量浓度为200 g/L，萃取温度为25 ℃，搅拌速度为500 r/min，萃取时间为4 h。8种氨基酸经衍生并萃取后进行色谱分析，在5 min内达基线分离，其峰面积与浓度在0.20～4.9×103 μmol/L范围内呈良好的线性关系，相关系数r2均大于0.999，富集倍数为110～290倍，检出限为0.08～0.35 μmol/L。在10 μmol/L加标水平下，大肠杆菌样品的平均回收率为88.7%～103.1%，相对标准偏差（n=5）为3.2%～4.3%。该方法灵敏度高、重复性好，可用于细菌中氨基酸的检测。
该研究获得了国家自然科学基金项目（21575042）资助，相关成果发表于《分析测试学报》2018年7期第790～795页。
doi：10.3969/j.issn.1004-4957.2018.07.006
【引用本文】：李仪, 赵双丽, 张炎, 何品刚, 王清江. 中空纤维膜微萃取/超高效液相色谱法检测大肠杆菌中氨基酸的研究[J]. 分析测试学报, 2018, 37(7):790-795.
【Cite this article】：LI Yi，ZHAO Shuang-li，ZHAN Yan，HE Pin-gang，WANG Qing-jiang. Determination of Amino Acids in Escherichia Coli.by Ultrahigh Performance Liquid Chromatography Combined with Hollow Fiber Membrane Microextraction[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2018, 37(7):790-795.
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